Del 4. Effekter af ekstremt lavfrekvente elektromagnetiske felter på tumorcelleinhiberingen og den mulige mekanisme

info-1437-249

Trypsin (optimal fordøjelsestid varierede fra celle til celle: 293 t, 1 min

blev afsluttet i mediet, og alle celler blev tilsat til centrifuge -røret . derefter blev hullet renset med

Normal saltvand mange gange og føjet til centrifuge -røret . På dette tidspunkt indeholdt centrifuge -røret alle celler .

Om celler blev efterladt i hullet blev observeret under mikroskopet .

Suspenderede celler: Alle cellesuspensioner blev anbragt i et centrifuge -rør . Hullerne blev vasket med normale

Salin flere gange og placeret i centrifuge -røret . På dette tidspunkt indeholdt centrifuge -røret alle celler . det

Porer blev observeret for cellester under mikroskopet .

Tælling: Cellerne blev centrifugeret, resuspenderet i et passende medium, fortyndet delvist og farvet

Med TryPan Blue . blev 10 µl af det injiceret gennem dækglasset .

Beregningsformel: Antal celler/4 × volumen × fortyndingsforhold × 104 .

Cellerne i hver gruppe blev talt tre gange for i alt tre grupper .

ph -værdi -detektion .Membran-permeabel fluorescensfarvestof BCECF AM og pH-følsomme fluores

cent sonde 2 ', 7'-bis-(2- carboxyethyl) -5- carboxyfluorescein (Beyotime Biotechnology, Kina) blev brugt til at vurdere

Den intracellulære pH -værdi . Cellerne blev dyrket i 96- godt plader og udsat for en 5- mt, 20- Hz magnetisk felt

I 2 timer på de første 2 dage . på dag 3 blev cellerne resuspenderet i 100 µl 25 um BCECF AM i 0,04% pluronic

F -127 arbejdsløsning og inkuberet i en CO2 -inkubator ved 37 ± 0 . 18 grader i 1 time. Supernatanten blev erstattet

med HHBS -buffer (AAT BioQuest, USA), og cellerne blev udsat for magnetfelteksponering for 2 H . den

Supernatant blev derefter erstattet med PBS, og pH -værdierne blev bestemt ved anvendelse af FITC flowcytometri (FACS

Calibur, Bd) .

Intracellulære calciumkoncentrationsassays .Membran-permeabel fluorescensfarvestof Calbryte

520 AM (AAT BioQuest) blev anvendt til at vurdere den intracellulære calciumkoncentration . Cellerne blev dyrket i

96- godt plader og udsat for en 5- mt, 20- Hz magnetfelt i 2 timer på de første 2 dage . på dag 3, cellerne var cellerne

resuspenderet i 100 µl 5 uM Calbryte 520 AM i 0,04% pluronic F -127 arbejdsløsning og inkuberet i en

CO2 -inkubator ved 37 ± 0 . 18 grad i 1 time. Supernatanten blev erstattet med HHBS -buffer (AAT BioQuest) og

Celler blev udsat for magnetfeltet i 2 timer . Supernatanten blev derefter erstattet med PBS, og intracel

Lulære calciumkoncentrationsværdier blev bestemt ved anvendelse af FITC Flow Cytometry (FACS Calibur) .

Bestemmelse af membranpotentialet for celler .Membranpotentialet blev bestemt ved hjælp af

Potential-følsom fluorescensfarvestof bis- (1, 3- dibutylbarbitursyre) trimethin oxonol (DiBac4) (3) (AAT bio

Quest) . Det fluorescerende farvestof DIBAC4 (3) gennemsyret i de depolariserede celler med højt membranpotentiale,

hvilket førte til en stigning i den intracellulære fluorescensintensitet . DiBac4 (3) blev udskrevet fra Hyperpo

Lariserede celler og den intracellulære fluorescensintensitet faldt . Cellerne blev dyrket i 96- godt plader og

udsat for et 5- mt, 20- Hz magnetfelt i 2 timer på de første 2 dage . Cellerne blev dyrket i 100 ul HHBS .

På dag 3 blev cellerne resuspenderet i 100 µl 10 uM DiBac4 (3) Am i 0,04% Pluronic F -127 Working Solu

tion og inkuberet i en CO2 -inkubator ved 37 ± 0 . 18 grad i 1 time. Supernatanten blev erstattet med HHBS -puffer

(AAT BioQuest), og cellerne blev udsat for magnetfeltet i 2 timer . Supernatanten blev derefter erstattet med

PBS og cellemembranpotentialerne blev bestemt ved anvendelse af FITC Flow Cytometry (FACS Calibur) .

Natriumiondetektion .Cellerne blev dyrket i 96- godt plader og udsat for en 5- mt, 20- Hz magnetisk

Felt i 2 timer på de første 2 dage . På dag 3 blev mediet erstattet med 100 µl HHBS og 100 µl 10 uM

SBFI AM (Cayman Chemical) i en 0 . 04% Pluronic F -127 arbejdsløsning. Supernatanten blev erstattet med

HHBS -buffer (AAT BioQuest) efter 4- H -inkubation i en CO2 -inkubator ved 37 ± 0,18 grad, og cellerne blev udsat for

Til magnetfeltet i 2 timer

Microplate Tester .

Kaliumiondetektion .Cellerne blev dyrket i 96- godt plader og udsat for en 5- mt, 20- Hz mag

Netisk felt i 2 timer på de første 2 dage. På dag 3 blev mediet erstattet med 100 µl HHBS og 100 µl af

10 uM PBFI AM (Cayman Chemical) i en 0 . 04% Pluronic F -127 arbejdsløsning. Efter 4- h inkubation i en CO2

Inkubator ved 37 ± 0,18 grad blev supernatanten erstattet med HHBS -puffer (AAT BioQuest), og cellerne var

Udsat for magnetfeltet i 2 timer . Kaliumionbestemmelsen blev udført ved 330/80 excitation og

528/20 Emission ved hjælp af en mikropladetester .

Trypan Blue Dyeing .293 T, HEPG2 og A549 celler i den logaritmiske vækstfase blev trypsin fordøjet

og høstet . raji -celler blev opsamlet direkte . efter centrifugering, cellerne blev farvet med det vitale

Dye Trypan Blue . De levende celler blev talt under et inverteret lysmikroskop (Carl Zeiss, Tyskland) . Cellen

Vækstinhiberingshastigheder blev bestemt, og repræsentative kurver blev afbildet . inhiberingshastighed (%)=(num

Ber af celler i kontrolgruppen - antal celler i magnetfeltgruppen) / antal celler i kontrollen

gruppe × 100%.

Statistisk analyse .Alle data blev udtrykt som gennemsnit ± standardfejl for middelværdien og envejsanalyse af

Varians blev brugt til sammenligning mellem flere grupper . Student t -testen blev brugt til at sammenligne de behandlede

versus ubehandlede grupper . AP -værdien<0.05 indicated a statistically significant difference. The confirmatory results

på s<0.05 were obtained from repeating studies at least two times. Each set of experiments had three parallel

prøver og hvert eksperiment blev gentaget tre gange .

Datatilgængelighed

Alle data præsenteres i denne offentliggjorte artikel og supplerende fil .

Referencer

{{0 yld

I osteoblaster . biochem . biophys . res . kommuner . 396 (3), 662–666 (2010) .

2. li, j . et al. . Naturligt statisk magnetisk feltinduceret apoptose i levercancercelle . elektromagn biol . med {{{6} (1), 47–50 (2014) {.}}

{Isse

J . radiat . biol . 84 (11), 945–955 (2008) .

4. Cameron, i . l . et al . terapeutisk elektromagnetisk felt (TEMF) og gamma -bestråling af human brystkræft Xenograft vækst,

Angiogenesis og metastase . kræftcelle int . 5, 23 (2005) .

5. de seze, r . et al . Effekter af 100 mt tidsvarierende magnetfelter på væksten af tumorer hos mus . bioelektromagnetik 21 (2), 107–111

(2000).

6. Novikov, V . V ., Novikov, G . V . & Fesenko, E . E . Effekt af svage kombinerede statiske statiske og ekstremt lav-frequency, som magnetiske

Felter om tumorvækst hos mus inokuleret med Ehrlich Ascites carcinoma . Bioelektromagnetik 30 (5), 343–351 (2009) .

7. Tatarov, i . et al . Effekt af magnetiske felter på tumorvækst og levedygtighed . komp.

8. tofani, S . et al . Forøget musens overlevelse, tumorvækstinhibering og nedsat immunreaktiv p53 efter eksponering for magnetisk

Felter . Bioelektromagnetik 23 (3), 230–238 (2002) .

{Isse

10 . 1002/bem .69 (2001).

{{0.

3891 (2001).

{{0.

Netics 27 (1), 64–72 (2006) .

12. Berg, H . et al . Bioelektromagnetiske felteffekter på kræftceller og mus tumorer . elektromagn biol . med . 29 (4), 132–143 (2010) {{10 {10}

{{0.

Anticancer res . 17 (3c), 2083–2088 (1997) .

{{0.

Cancer Res . 81 (9), 956–961 (1990) .

{{0.

Bao 31 (9), 1363–1374 (2015) .

{{0.

I kombination med paclitaxel . Cancer Lett . 343, 107–114 (2014) .

17. el-Bialy, n . s . & rageh, m . m . Ekstremt lavfrekvent magnetfelt forbedrer den terapeutiske effekt af lav dosis cisplatin i

Behandlingen af Ehrlich Carcinoma . biomed . res . int . 2013, 189352 (2013) .

18. Gellrich, d . et al . Modulering af eksponering for statisk magnetfelt påvirker målrettet terapi af faste tumorer in vivo . anticancer res .}

38, 4549–4555 (2018).

{{0.

One 8 (9), E72944 (2013) .

{{0}.

Bioelektromagnetik 17 (5), 358–363 (1996) .

{Isse

Elektromagnetik 32 (6), 443–452 (2011) .

22. Buckner, C . A . et al . Inhibering af kræftcellevækst ved eksponering for et specifikt tidsvarierende elektromagnetisk felt involverer T-type.

Calciumkanaler . PLOS One 10 (4), E0124136 (2015) .

23. Wang, M . H . et al . Effekt af ekstremt lavfrekvenselektromagnetiske feltparametre på spredning af human brystkræft .}

Elektromagn . biol . med . 40 (3), 384–392 (2021) .

24. Kim, S . H . et al . toksicitet Bioassay i Sprague - DAWLEY ROTS udsat for 20 kHz trekantet magnetisk felt i 90 dage . bioelectromagromags udsat for 20 kHz trekantet

Netics 27 (2), 105–111 (2006) .

25. ashdown, c . p . et al . Pulseret lavfrekvente magnetiske felter inducerer tumormembranforstyrrelse og ændret celleviabilitet . biophys .}

J. 118, 1552–1563 (2020).

{{0.

felter . gynecol . oncol . 71 (1), 64–71 (1998) .

27. Zhou, y . et al . signaltransduktion . Membranpotentiale modulerer plasmamembranphospholipid-dynamik og K-RAS signalering .}

Science 349, 873–876 (2015) .

{{0.

(2016).

29. Leslie, t . k . et al . natriumhomeostase i tumormikro -miljøven 188304

(2019).

30. Wang, x . x . et al . Storskala DNA-methyleringsanalyse Analyse på tværs af 12 faste kræftformer afslører hypermethylering i den

Calcium-signaleringsvej . Oncotarget 8 (7), 11868–11876 (2017) .

Anerkendelser

Vi takker professor Peter K . lov fra Cell Therapy Institute, Wuhan, Kina, for teknisk assistance .

Forfatterbidrag

J . s . designet undersøgelsen, udførte de fleste af eksperimenterne, analyserede data og skrev manuskriptet . h . W .

rådgivet om eksperimentdesign og hjulpet med eksperimenter . y . j ., x . j ., y . c og y . y . t {.} i undersøgelse.

og udførte eksperimenter . W . y . j . kommenteret på manuskriptet . z . m, k . c, x . d {{{. l, l, l, l, l, {. {{. d {{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{{8 {{8 {. Z . l . c og j . m . w partici

Pateret i produktion og måling af magnetfeltinstrumenter . g . h . y . designet og overvåget det

Undersøg, fortolkede data og skrev manuskriptet .

Finansiering

Den særlige fond til kræftforebyggelse og behandling af Shanghai Science and Technology Development Foun

dation (tilskudsnummer CT20200517A) .

Konkurrerende interesser

Forfatterne erklærer ingen konkurrerende interesser .

Yderligere oplysninger

Supplerende informationOnlineversionen indeholder supplerende materiale, der er tilgængeligt på https: // doi . org/

10.1038/s41598-023-34144-5.

Korrespondanceog anmodninger om materialer skal rettes til g . y .

Genoptryk og tilladelser om tilladelserfås på www . Nature . com/genoptryk .

Publisher's noteSpringer Nature forbliver neutral med hensyn til jurisdiktionskrav i offentliggjorte kort og

Institutionelle tilknytninger .

Åben adgangDenne artikel er licenseret under en Creative Commons Attribution 4.0 International International

Licens, der tillader brug, deling, tilpasning, distribution og reproduktion i ethvert medium eller

Format, så længe du giver passende kredit til den eller de originale forfatter (e) og kilden, giver et link til

Creative Commons -licens og angiv, om der blev foretaget ændringer . billederne eller andet tredjepartsmateriale i dette

Artikel er inkluderet i artiklens Creative Commons -licens, medmindre andet er angivet i en kreditlinje til

Materiale . Hvis materiale ikke er inkluderet i artiklens Creative Commons -licens og din tilsigtede brug er ikke

tilladt ved lovpligtig regulering eller overstiger den tilladte anvendelse, skal du få tilladelse direkte fra

Besøg http: // creativecommons. For at se en kopi af denne licens.